2017-06-20川贝母

川贝母
一、川贝母药典标准     本品为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肃贝母Fritillaria przewalskii Maxim.、梭砂贝母Fritillaria delavayi Franch.、太白贝母Fritillaria taipaiensis P.Y.Li或瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar wabuensis（S.Y.Tang et S.C.Yue）Z.D.Liu，S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞茎。按性状不同分别习称“松贝”、“青贝”、“炉贝”和“栽培品”。夏、秋二季或积雪融化后采挖，除去须根、粗皮及泥沙，晒干或低温干燥。
    【性状】松贝 呈类圆锥形或近球形，高0.3～0.8cm，直径0.3～0.9cm。表面类白色。外层鳞叶2瓣，大小悬殊，大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”；顶部闭合，内有类圆柱形、顶端稍尖的心芽和小鳞叶1～2枚；先端钝圆或稍尖，底部平，微凹入，中心有1灰褐色的鳞茎盘，偶有残存须根。质硬而脆，断面白色，富粉性。气微，味微苦。
    青贝 呈类扁球形，高0.4～1.4cm，直径0.4～1.6cm。外层鳞叶2瓣，大小相近，相对抱合，顶部开裂，内有心芽和小鳞叶2～3枚及细圆柱形的残茎。
    炉贝 呈长圆锥形，高0.7～2.5cm，直径0.5～2.5cm。表面类白色或浅棕黄色，有的具棕色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部开裂而略尖，基部稍尖或较钝。
    栽培品呈类扁球形或短圆柱形，高0.5～2cm，直径1～2.5cm。表面类白色或浅棕黄色，稍粗糙，有的具浅黄色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部多开裂而较平。
    【鉴别】（1）本品粉末类白色或浅黄色。
    松贝、青贝及栽培品 淀粉粒甚多，广卵形、长圆形或不规则圆形，有的边缘不平整或略作分枝状，直径5～64μm，脐点短缝状、点状、人字状或马蹄状，层纹隐约可见。表皮细胞类长方形，垂周壁微波状弯曲，偶见不定式气孔，圆形或扁圆形。螺纹导管直径5～26μm。
    炉贝 淀粉粒广卵形、贝壳形、肾形或椭圆形，直径约至60μm，胳点人字状、星状或点状，层纹明显。蜾纹导管和网纹导管直径可达64μm。
    （2）取本品粉末10g，加浓氨试液10ml，密塞，浸泡1小时，加二氯甲烷40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素乙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液1～6μl对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液-水（18：2：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
    （3）聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。
    模板DNA提取 取本品0.1g，依次用75%乙醇1ml、灭菌超纯水1ml清洗，吸干表面水分，置乳钵中研磨成极细粉。取20mg，置1.5ml离心管中，用新型广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA[加入缓冲液AP1 400μl和RNA酶溶液（10mg/ml）4μl，涡漩振荡，65℃水浴加热10分钟，加入缓冲液AP2 130μl，充分混匀，冰浴冷却5分钟，离心（转速为每分钟14000转）10分钟；吸取上清液转移入另一离心管中，加入1.5倍体积的缓冲液AP3/E，混匀，加到吸附柱上，离心（转速为每分钟13000转）1分钟，弃去过滤液，加入漂洗液700μl，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再加入漂洗液500μl，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再离心（转速为每分钟13000转）2分钟，取出吸附柱，放入另一离心管中，加入50μl洗脱缓冲液，室温放置3～5分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟，将洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟]，取洗脱液，作为供试品溶液，置4℃冰箱中备用。另取川贝母对照药材0.1g，同法制成对照药材模板DNA溶液。
    PCR-RFLP反应 鉴别引物：5'CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为30μl，反应体系包括10×PCR缓冲液3μl，二氯化镁（25mmol/L） 2.4μl，dNTP（10mmol/L）0.6μl，鉴别引物（30μmol/L）各0.5μl，高保真Taq DAN聚合酶（5U/μl）0.2μl，模板lμl，无菌超纯水21.8μl。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95℃预变性4分钟，循环反应30次（95℃30秒，55～58℃30秒，72℃30秒），72℃延伸5分钟。取PCR反应液，置500μl离心管中，进行酶切反应，反应总体积为20μl，反应体系包括10×酶切缓冲液2μl，PCR反应液6μl，Sma I（10U/μl）0.5μl，无菌超纯水11.5μl，酶切反应在30℃水浴反应2小时。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RFLP反应操作，作为空白对照。
    电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（通则0541），胶浓度为1.5%，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品与对照药材酶切反应溶液的上样量分别为8μl，DNA分子量标记上样量为lμl（0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在100～250bp应有两条DNA条带，空白对照无条带。
    【检查】水分 不得过15.0%（通则0832第二法）。
    总灰分 不得过5.0%（通则2302）。
    【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于9.0%。
    【含量测定】对照品溶液的制备 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
    标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液（取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol/L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾lg，加水使溶解并稀释至100ml，即得）2ml，密塞，剧烈振摇1分钟，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在415nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
    测定法 取本品粉末（过三号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时，加三氯甲烷-甲醇（4：1）混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇（4：1）混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（4：1）混合溶液至刻度，摇匀。精密量取2～5ml，置25ml具塞试管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷10ml使溶解，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加水5ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中西贝母碱的重量（mg），计算，即得。
    本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱（C27H43NO3）计，不得少于0.050%。
    【性味与归经】苦、甘，微寒。归肺、心经。
    【功能与主治】清热润肺，化痰止咳，散结消痈。用于肺热燥咳，干咳少痰，阴虚劳嗽，痰中带血，瘰疬，乳痈，肺痈。
    【用法与用量】3～10g；研粉冲服，一次1～2g。
    【注意】不宜与川乌、制川乌、草乌、制草乌、附子同用。
    【贮藏】置通风干燥处，防蛀。


二、川贝母化学成分
1.暗紫贝母鳞茎含生物碱：松贝辛（songbeisine），松贝甲素（sonbeinine）。还含蔗糖（sucrose），硬脂酸（stearicacid），棕榈酸（palmiticacid），β-谷甾醇（β-sitosterol）。
2.卷叶贝母鳞茎含生物碱：川贝碱（fritimine），西贝素（sipeimine）。
3.棱砂贝母鳞茎含生物碱：棱砂贝母碱（delavine），棱砂贝母酮碱（delavinone），川贝酮碱（chuanbeinone），棱砂贝母芬碱（delafrine），棱砂贝母芬酮碱（delafrinone），（22R，25S）-5-茄啶-烯-3β，5α，6β-三醇〔（22R，25S）-solanid-5-en-3β，5α，6β-triol〕，贝母辛碱（peimissine），西贝母碱（imperialine）即是西贝素，川贝碱，炉贝碱（fritiminine）。

三、川贝母药理作用
1.对呼吸系统的作用：
 1.1镇咳作用：小鼠氨水引咳法证明，ig贝母总生物碱及非生碱部分均有镇咳作用。

 1.2祛痰作用：采用小鼠酚红排泌法，以3.9g/kg（ig）剂量作时效曲线，分别在给药后30、60、120分钟立即ip0.25%酚红（（0.2ml/10g），按分光光度法测558nm处吸收度。结果表明，组培川贝和野生川贝均具有祛痰作用，给药60分钟后为作用峰值，给药2小时后作用下降。选时效峰值时间60分钟，按1.5g/kg及3.0g/kg给药，结果表明，两种川贝的祛痰效果均随剂量加大而增强。其它小鼠服用30g/kg川贝母煎剂，药后60分钟与药前比较，痛阈降低。

2.抗溃疡作用
 2.1对大鼠结扎幽门性溃疡的影响：大鼠断食48h后麻醉、开腹，结扎胃幽门，缝合腹壁后sc平贝总生物碱（简称总碱）3、1.5mg/100g，对照组用等体积生理盐水。给药后9小时断头处死，收集胃液，同时测定胃液量，游离酸，总酸及胃蛋白酶活性，并用肉眼观察溃疡形成情况。结果两种剂量对胃蛋白酶有显着的抑制作用，与对照组比较P＜0.01，1.5mg/100g组的溃疡指数亦显着低于对照组P＜0.01。

 2.2对应激性溃疡的影响：采用上述剂量，观察对应激性溃疡大鼠的溃疡指数。结果1.5mg/100g组有明显的抑制作用，与生理盐水对照组比较P＜0.05。

 2.3对消炎痛所致胃溃疡的影响：大鼠按上述剂量ip给药后各组均ip消炎痛40mg/kg，给药后处死，取胃观察溃疡程度。结果3.0mg/100g的总碱对消炎痛所致的胃溃疡有抑制作用，与对照组比较P＜0·01。

3.其它作用。川贝母碱静脉注射对麻醉猫产生持久的血压下降，伴以短时呼吸抑制，能增强豚鼠离体子宫收缩，抑制离体兔肠，并无扩大瞳孔的作用。对小鼠的最小致死量为40mg/公斤，死前有痉挛，还引起家兔血糖升高。

西贝母碱对麻醉狗有降压作用，主要由于外周血管扩张，对心电图无明显影响。对离体豚鼠回肠、兔十二指肠、大鼠子宫及整体狗小肠均有明显松弛作用，解痉作用类似罂粟碱。
贝母素丙（川贝母素，fritimine）4mg/kg静脉注射，能吏麻醉猫产生持久性血压下降，伴以短暂的呼吸抑制；7.5-16mg/kg静脉注射，能使兔血糖升高；1：50000浓度能使离体豚鼠子宫收缩，1:100000浓度能抑制离体兔肠的运动；对小鼠的最小致死量为40mg/kg。
平贝母浸膏对实验动物具有中枢神经系统抑制作用。